本文標(biāo)題："動物細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)的激發(fā)源成像細(xì)胞分析顯微鏡"
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動物細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)的激發(fā)源成像細(xì)胞分析顯微鏡
哺乳動物細(xì)胞時延性共聚焦成像以下的許多步驟適用于任何配置
的顯微鏡，不過本例是關(guān)于時延性共聚焦成像的，這是一個普通的
GFP時延性成像試驗(yàn)，使用的是激光掃描共聚焦顯微鏡。1．除了是
在二氧化碳濃度可以控制的環(huán)境中捕獲細(xì)胞影像，其他條件下成像
均需要補(bǔ)充不同的大氣二氧化碳水平。例如，如果需要含有血清的
生長培養(yǎng)基，加入25mmol／L HEPES，pH7．6，可以滿足某種類型
的細(xì)胞成像。如果可能的話，用小型儀器監(jiān)測緩沖液中的細(xì)胞。2
．用括號中的任一儀器保持成像細(xì)胞的溫度(例如，完全封閉的顯
微鏡培養(yǎng)箱，循環(huán)水浴溫度控制器，獨(dú)立控制的階段加熱器，熱空
氣對流元件)。注意：這些溫度控制元件的效率和價(jià)格按照從前到
后依次遞減。3．各種可用的熒光蛋白極大地降低了成像的硬件要
求。使用標(biāo)準(zhǔn)的激發(fā)源和濾過設(shè)備能捕獲很多這些蛋白質(zhì)。表5．1
0．1列出了激光激發(fā)源的一些常用變量。4．EGFP和EYFP，作為最
常用的綠色熒光蛋白，能在一定程度上抵抗光漂白作用，但是在任
何試驗(yàn)中都要考慮這種現(xiàn)象。應(yīng)該盡可能地降低這些激發(fā)力，以延
長熒光標(biāo)記物的壽命。5．通常盡可能地保持蛋白質(zhì)的低表達(dá)，
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